材料與方法

感受態(tài) ＢＬ２１，天根生化科技有限 公司產(chǎn)品；ＩＰＴＧ，北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品；Ｎｉ －ＮＴＡ 瓊脂糖交聯(lián)樹脂，碧云天生物技術(shù)有限公司 產(chǎn)品；弗氏佐劑、ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ、Ｉｍｉｄａｚｏｌｅ，北京索 萊寶科技有限公司產(chǎn)品。超聲波破碎儀（ＪＹ９２－Ⅱ）、高速分 散均質(zhì)機(jī)（Ｓ１０），寧 波 新 芝 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司 產(chǎn)品；渦旋 混 合 器（ＱＬ－９０１），海門市其林貝爾儀器 制造有限公司產(chǎn)品；分光光度計(jì)（ＮａｎｏＤｒｏｐ－１０００）， Ｌｉｍｉｔｅｄ基因有限公司產(chǎn)品。

結(jié)果

用 特 異 性 引 物 ＵＢＣＨ６－Ｆ 和 ＵＢＣＨ６－Ｒ 通 過 ＰＣＲ方法擴(kuò)增 ＵＢＣＨ６基因５８２ｂｐ的片段。膠回收目的片段后，與ｐＭＤ１８－Ｔ載體連 接，轉(zhuǎn)化搖 菌，菌 液 ＰＣＲ 鑒定結(jié)果為陽性的抽提質(zhì) 粒，菌液ＰＣＲ結(jié)果。將陽性質(zhì)粒送測(cè)序 驗(yàn)證后，證明目的片段成功與ｐＭＤ１８－Ｔ載體連接。分 別 用 ＢａｍＨⅠ／ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅠ／ＮｏｔⅠ 對(duì) 重組原核表達(dá)載體ｐＧＥＸ－ＵＢＣＨ６和重組真核表達(dá) 載體ｐｃＤＮＡ－ＵＢＣＨ６進(jìn)行雙酶切鑒定。同時(shí)將重組原核與真核表達(dá)載體送 測(cè)序驗(yàn)證，結(jié)果表明重組表達(dá)載體連接成功。