白芷為傘形科植物白芷 Angelica dahurica ( Fisch． ex Hoffm． ) Benth． et Hook． F 或 杭 白 芷 A． dahurica( Fisch． ex Hoffm． ) Benth． et Hook． F． var． formosana ( Boiss． ) Shan et Yuan 的干燥根，其性辛、溫， 歸胃、大腸、肺經(jīng)，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。臨床應(yīng)用廣泛，具有解表散寒、祛風(fēng)止痛、宣通鼻竅、燥濕止 帶、消腫排膿之功效，用于治療感冒頭痛、眉棱骨痛、 鼻塞流涕、帶下、瘡癰腫痛等癥。

1 儀器與試藥

1． 1 儀器

Acquity UPLC H-Class 超高效液相色譜系統(tǒng)，配 備 Acquity UPLC PDA 檢測器、Empower2 工作站( 美 國 Waters 公司) ; Legend Micro 17Ｒ 微量離心機(jī)( 美 國 Thermo 公司) ; CPA225D 電子天平( 賽多利斯科 學(xué)儀器有限公司) ; FA2004B 電子天平( 上海佑科儀 器儀表有限公司) ; KQ-300DE 型數(shù)控超聲波清洗器 ( 昆山市超聲儀器有限公司) ; VOＲTEX-5 渦旋儀 ( 其林貝爾儀器制造有限公司) 。

1． 2 藥品與試劑

花椒毒酚( 批號(hào): HX106886198) 、異紫花前胡內(nèi) 酯( 批號(hào): HM048527198) 、水合氧化前胡素( 批號(hào): HA061413198) 、白當(dāng)歸素( 批號(hào): HB157470198) 、補(bǔ) 骨脂 素 ( 批 號(hào): HP018120198 ) 、花 椒 毒 素 ( 批 號(hào): HA061509198) 、佛手柑內(nèi)酯( 批號(hào): HB204394198) 、 氧化前胡素( 批號(hào): HA062924198) 、歐前 胡 素( 批 號(hào): HI041232198 ) 、 異 歐 前 胡 素 ( 批 號(hào): HI041233198) ，以上對(duì)照品均購自寶雞辰光生物科 技有限公司，純度 ＞ 98% 。甲醇( 色譜純，美國 Fisher 公司) 、乙腈( 色譜純，美國 Fisher 公司) ，其余為 分析純; 水為屈臣氏純凈水。本實(shí)驗(yàn)搜集了四川、杭 州、安徽、河南、河北等地的白芷藥材樣品，信息見表 1，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng) 新中心劉世軍副教授鑒定，為白芷 Angelica dahurica ( Fisch． ex Hoffm． ) Benth． et Hook． F 或 杭 白 芷 A． dahurica( Fisch． ex Hoffm． ) Benth． et Hook． F． var． formosana ( Boiss． ) Shan et Yuan 的干燥根，其中 S1、 S3、S4、S7 批次為硫磺熏蒸過的白芷樣品，S2、S5、 S6、S8、S9、S10 批次為無硫磺熏蒸過的白芷樣品。


2 方法與結(jié)果

色譜柱: ACQUITY UPLC BEH C18 ( 50 mm × 2. 1 mm，1． 7 μm) ; 流動(dòng)相: 水( A) -乙腈( B) ; 梯度洗脫 ( 0 ～ 5 min，10% ～ 25% B; 5 ～ 18 min，25% ～ 60%B; 18 ～ 22 min，60% ～ 90% B; 22 ～ 25 min，90% ～ 10% B; 25 ～ 30 min，10% B) ; 流速: 0． 2 mL /min; 檢 測波長: 254 nm; 進(jìn)樣量為 2 μL; 柱溫 25 ℃。在上 述條件下，各色譜峰分離度良好。精密稱取各對(duì)照品適量，分別加甲醇溶解并稀 釋制備成濃度為 1 mg /mL 的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液; 精密 吸取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備溶液適量，混合后加甲醇稀 釋，配置混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，其中含歐前胡素、異歐 前胡素和氧化前胡素 500 μg /mL，水合氧化前胡素 250 μg /mL，花椒毒酚、白當(dāng)歸素和佛手柑內(nèi)酯 50 μg /mL，異紫花前胡內(nèi)酯、補(bǔ)骨脂素和花椒毒素 25 μg /mL。由于歐前胡素 在各批次白芷中均有出現(xiàn)，分離度良好且峰面積較 大，故選擇歐前胡素( 11 號(hào)峰) 作為參照峰( S) ，計(jì) 算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。相對(duì)保 留時(shí)間和峰面積 ＲSD 均在 3% 以內(nèi)，表明儀器精密度良好。

3 結(jié)論

分別對(duì)提取溶劑( 50% 甲醇、75% 甲醇、 純甲醇、50% 乙醇、75% 乙醇、乙醇) 、藥材-溶液比( 1 ∶ 10、1∶ 20、1 ∶ 50、1 ∶ 100) 以及超聲提取時(shí)間( 0． 5、 0. 75、1． 0、1． 5 h) 進(jìn)行了系統(tǒng)考察，以提取方法穩(wěn)定 可行，提取效率最優(yōu)，色譜峰響應(yīng)、分離度良好為指 標(biāo)，最終選擇的提取溶劑為純甲醇、藥材-溶液比為 1∶ 20、超聲提取時(shí)間為 1． 5 h。 通過考察了樣品在甲醇-水、乙睛-水、甲醇-酸水 和乙睛-酸水作為流動(dòng)相系統(tǒng)時(shí)，各色譜峰的分離效 果，發(fā)現(xiàn)乙睛-水作為流動(dòng)相系統(tǒng)時(shí)，各色譜峰的分離度最好，峰形最佳，基線較平穩(wěn)。用 PDA 檢測器 對(duì)樣品進(jìn)行 190 ～ 400 nm 全波長掃描，比較各波長 下色譜圖: 除異紫花前胡內(nèi)酯在 325 nm 左右有較大 吸收外，其他呋喃香豆素成分均在 254 nm 有較大吸 收，且在 254 nm 處，色譜峰個(gè)數(shù)較多，分離度好，響 應(yīng)合理，因此選定 254 nm 為白芷藥材指紋圖譜的測定波長。



 

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