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其林貝爾

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急性髓系白血病分析(其林貝爾LX-400使用)

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2020-03-13 09:22【

材料和方法 


病例的一般資料 收集 2016 年 8 月-2018 年 8 月蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附 屬醫(yī)院血液內(nèi)科經(jīng)細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、 分子生物學(xué)(MICM)確診的初發(fā)急性髓系白血病 患者 108 例,其中男 61 例,女 47 例;中位年齡 55(13-79)歲。依據(jù) FAB 分型標(biāo)準(zhǔn):除去 1 例急 性混合細(xì)胞白血病,其余 AML-M1 8 例,AML-M2 45 例,AML-M3 10 例,AML-M4 18 例,AML-M5 25 例, M6 1 例。


試劑與儀器 


DNA 提取試劑盒為上海源奇生物醫(yī)藥科技生物 公司產(chǎn)品;引物合成為生工生物工程有限公司產(chǎn) 品;PCR 試劑盒為日本 TaKaRa 公司產(chǎn)品;瓊脂 糖為上海百研生物科技公司產(chǎn)品;TAE 為廣州賽 國生物科技公司產(chǎn)品;溴化乙錠為江蘇凱基生物 公司產(chǎn)品。低溫高速離心機(jī)為美國 Thermo 科技公 司產(chǎn)品;LX-400 迷你離心機(jī)為海門市其林貝爾儀器制造有限公司產(chǎn)品;酶標(biāo)儀為美國 BioTek 儀器 有限公司;PCR 儀為美國 Applied Biosystems 公司 產(chǎn)品;水平式凝膠電泳槽及電泳儀均為上海 Tanon 科技公司產(chǎn)品;全自動凝膠成像系統(tǒng)為上海 Tanon 科技公司產(chǎn)品。 基因組 DNA 的制備 按照 DNA 抽提試劑盒說明書要求(上海源奇生物 醫(yī)藥科技有限公司)提取基因組DNA,測定吸光度, 所有用于PCR的DNA樣本的OD260/280比值均> 1.8, 去離子水稀釋基因組 DNA 樣品至 50-150 ng/μl。 目的基因的 PCR 擴(kuò)增 根據(jù) GenBank 上目標(biāo)基因序列,由 生工生物工程(上海)股份有限公司合成:正義鏈: 5′-GACTGAGTACAAACTGGTGG-3′,反義鏈:5′-TG CATAACTGAATGTATACCC-3′,擴(kuò)增產(chǎn)物長度 250 bp;PCR 擴(kuò)增的反應(yīng)體系 50 μl:10×PCR buffer (Mg2+ )5 μl + dNTP Mixture 4 μl + 引物 F 0.5 μl+ 引物 R 0.5 μl + Tap 酶 0.25 μl + DNA 標(biāo)本 2 μl, 去離子水補(bǔ)足體積(PCR 試劑盒來自寶日醫(yī)生物 技術(shù)有限公司)。


結(jié) 果


NRAS 基因 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果及 基因測序圖列于圖 1、圖 2。108 例 AML 患者中發(fā) 現(xiàn),11 例有 NRAS 突變,其中 G12D 6 例、G13D 3 例、G61K 2 例,突變率為 10.2%。108 例 AML 患者中 105 例有完整核型分析資料。 10 例 NRAS 突變患者擁有可供分析的染色體核 型,其中 4 例為正常核型,故其在正常核型中的 突變率為 7.84%,與未突變組比較無明顯差異(P > 0.05)。細(xì)胞遺傳學(xué)高危、中危、低危患者分 別 為 1 例、6 例 和 3 例, 所 占 比 分 別 為 12.5%、 10.17%、4.55%。3 組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析亦無明顯差 異(P> 0.05)。


討 論 


NRAS 基因編碼是一種 21KD 的膜蛋白,其作為一 種“分子開關(guān)”,位于細(xì)胞膜表面,可以將細(xì)胞 外的信號轉(zhuǎn)至細(xì)胞核,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分 化和凋亡 。而 NRAS 突變主要是集中在外顯子 1、 2 處涉及 12、13、61 密碼子的錯(cuò)義突變,其作 為目前公認(rèn)的致人 AML 的 2 類合作突變中的Ⅰ類 突變,賦予細(xì)胞增殖和生存優(yōu)勢,從而參與 AML 的發(fā)生發(fā)展。






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